R&D Systems® Luminex®多因子检测，实验常见问题解答

R&D Systems® Luminex®多因子检测包含了哪些组分?

预混的Luminexo®多因子检测是一个完整的试剂盒，包含了预包被的微球混合物、生物素化检测抗体混合物、标准品、稀释液、校准品稀释液、检测稀释液、链霉亲和素-PE浓缩液、清洗液、微孔板和封板膜。检测指南和产品说明书也包含在内，可指导用户完成整个检测过程。

Luminex®试剂盒可检测多少个样品?

通常来说可检测40个用户提供的样品，每个重复两次。这将取决于标准曲线评估的数据点的个数以及是否包含质控。R&D Systems® Luminex® Assay通常使用六点标准曲线，而High Performance Assay使用七点标准曲线。请参考数据表，了解试剂盒特有的详细信息。

这些试剂盒可检测哪些样品?

通常来说，R&D Systems® Luminex®试剂盒已针对血清、两种类型的血浆(用EDTA或肝素抗凝)和细胞培养上清液进行了验证。不过，验证的样品类型可能因产品而异。产品数据表和产品网页上说明了经过验证可用于特定试剂盒的所有样品类型。我们仅支持对这些样品进行赔付。参考文献中可能列出了其他样品类型。请参考产品网页上的"Citations"标签页，获取已发表的参考文献，这些文献引用了采用该试剂盒来检测其他的样品类型。用户应负责对未经验证的样品类型进行验证。

这款试剂盒是否测试过我的样品类型?

R&D Systems®并未在Luminex®试剂盒上常规测试所有的样品类型，如组织匀浆液或支气管肺泡灌洗液。这并不意味着 Luminex®试剂盒不适用于其他的样品类型。每位研究人员需要开展掺入回收研究，以确定未经验证的样品类型是否适用于该试剂盒。在开展掺入回收实验时，研究人员应将样品分成两等份。在其中一份中掺入已知量的试剂盒标准品，并进行连续稀释，以比较掺入和未掺入的样品。这种方法可用来验证R&D Systems®尚未评估的所有样品类型。

关于掺入回收操作的详细步骤，请联系技术支持。注意:可接受的范围应当由每个实验室自行确定。请参考"Citations"标签页，阅读使用各种样品类型的同行评审论文。

为什么检测不到任何样品?

您能够对低至标准曲线上最低点的样品进行定量。在某些情况下，标准曲线上的最低点很低，足以检测正常样品。您可以查看分析物数据表上的“样品值”部分，了解我们从健康个体中获得了哪种类型的样品值。您也可以回顾一下文献，看看检测目标是否有己确定的正常范围。需要注意的是，不同的检测平台和制造商在其独特检测产品的校准上有所不同，其报告的测量值可能没有直接关联。

我可以(向任一方向)延长标准曲线吗?

在任何情况下，R&D Systems®均不支持超出指定范围的试利盒结果。之所以选择特定范围，是因为检测重复性的置信度。

什么是检测灵敏度?

灵敏度是统计学上不为零的最低可测量值。它是根据背景信号和检测的固有可变性来计算的。通常是通过读取20个零标准孔重复的平均荧光强度(MFI)再加两倍标准偏差来确定的。根据标准曲线将此数值转换成分析物浓度。而标准曲线的低值是R&D Systems®确信该值位于标准曲线的线性部分，因而是可定量的最低点。大于灵敏度的值可与检测背景或噪声区分开，但报告这些值的置信度将低于落在标准曲线范围内样品值的置信度。

为什么需要对样品进行稀释?

样品稀释主要有两个原因。在某些检测中，大多数样品的读数均高于标准曲线，因此需要稀释使分析物水平落在检测范围内。第二个原因是限制基质效应引起的干扰。

检测稀释液的添加不会进一步稀释样品吗?

检测稀释液是添加在所有孔中的，故标准品和样品经过了同样处理。因此可从标准曲线中读取样品浓度，而无需对此稀释进行调整。

校准稀释液是否足够用于所有的样品制备?

试剂盒中附带了足够的校准稀释液，以确保绝大多数样品都落在指定的检测范围内。如果您发现试剂盒中没有足够的稀释液来稀释样品，那么您有两种选择。第1种选择:将样品分两步稀释。第一步稀释用培养基，第二步稀释(至少1:10)用试剂盒中提供的校准稀释液。第2种选择:您可以另外购买稀释液，前提是相同批号的稀释液仍然有售。请联系技术服务部门，了解更多信息。

我的稀释液似乎含有沉淀，没问题吗?

由于某些缓冲液组分的饱和度，一些RD1检测稀释液含有少量或大量沉淀。这不会影响检测。具体的操作手册将对这种情况进行说明。如果操作手册中未说明，请联系技术服务部门。

试剂盒的质控品有售吗?

对于R&D Systems® Luminex® Assay,我们不出售试剂盒的质控对照。不过，在R&D Systems® Luminex® High Performance Assay中或包含试剂盒对照，或作为补充产品出售。请咨询具体的订购信息。

补充质控品的稳定性如何?

质控品的有效期是自收到之日起6个月内。它们只能使用一次，之后请丢弃。如果冻干的对照可妥善保存，则它们可能在较长时间内保持稳定，但我们尚未开展延长稳定性测试。对照重溶后的稳定性未经过测试。

我使用贵司的重组蛋白作为相应的R&D Systems® Luminex®多因子检测试剂盒的对照。为什么我看到数值有差异?

首先，需要大量稀释才能让重组蛋白置于标准曲线范围内。通常来说，这是从µg/mL到pg/mL的稀释。所有稀释步骤都会引入不准确性，稀释的幅度越大，产生错误的可能性就越大。任何移液错误或未校准的移液器都会导致明显的回收率过高或不足。其次，R&D Systems® Luminex®多因子检测的开发是为了测定被一种抗体捕获并被另一种抗体检测的蛋白质水平。这种检测采用最初开发试剂盒时建立的标准品进行校准。这些初始标准品的蛋白质测定成为配制新标准品的主校准品。这使得不同批次的R&D Systems® Luminex®免疫检测试制盒具有一致性。通常，在使用Luminex® Assay测定蛋白质浓度时，我们预计回收率为管上标明量的+/-30%。对于不同批次的蛋白质，免疫学上可识别的质量可能略有差异，因此在用于免疫检测时，不同批次产品管壁上规供的表面浓度也会有所不同。如果您使用蛋白质作为质控，在设定质控水平时最好根据免疫检测中的测量值来分配质量，而不使用管上标注的质量。

为什么必须使用聚丙烯管来进行标准曲线的稀释?

某些蛋白质或分析物会与玻璃或聚苯乙烯结合，但不容易与聚丙烯管结合。

我可以使用部分微孔板吗?

您无需一次性用完一整块微孔板上的全部孔，可以保留微球或生物素化检测抗体混合物浓缩液。但建议您检测时应制备新鲜的工作液，包括微球、生物素化检测抗体、标准品和质控品。冻干的标准品和质控品仅供一次性使用，非且需要在检测时新鲜制备。

我能否根据试剂盒说明书中的说明调整孵育时间或温度?

R&D Systems®已优化了检测的孵育时间和温度。每个试剂盒均已按照试剂盒说明书中的操作方案进行了验证。如果操作方案经过任何更改，我们将无法保证试剂盒的性能。

不同试剂盒中的试剂可互换吗?

检测稀释液、校准稀释液及其他试剂盒组分只有在货号和批号都相同的情况下才可以互换。R&D Systems®进行了"试剂盒整体质量控制"，这意味着我们不支持在检测中使用其他批次或来源的试剂来代替。

为什么样品重复之间存在很高的差异性?

较高的批内差异性可能是由移液技术和/或清洗技术不佳造成的。