Corning® Matrigel ® Matrix常见问题解答康宁 Matrigel matrix 的组成 康宁 Matrigel matrix 是从富含胞外基质蛋白的 EHS 小鼠肿瘤中提取的基底膜基质,其中含有约 60%层粘连蛋白、30% IV 胶原和 8%的巢蛋白。康宁 Matrigel matrix 还含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、组织纤溶酶原及其他生长因子。 融化康宁 Matrigel matrix 需要多长时间? 产品需要放置于冰上,并在 2ºC-6ºC 的冰箱中或者冷室中过夜融化,蛋白浓度高时可能需要更多时间。 使用康宁 Matrigel matrix 时需要预冷移液管和管子吗? 是的。因为康宁 Matrigel matrix 在 10ºC 以上时会成胶,操作康宁 Matrigel matrix 时,我们建议使用预冷的移液管、吸头和管子。 康宁高浓度 Matrigel matrix 用于哪些实验? 康宁高浓度的 Matrigel matrix matrix 可适用于体内应用研究,如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使康宁 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位,便于用于原位分析和/或 以后的切除。 如何将康宁 Matrigel matrix 用于 3D 培养? 怎样制作 3D 胶? 需要将细胞嵌入到康宁 Matrigel matrix 中吗? 康宁高浓度的 Matrigel matrix 可适用于体内应用研究,如制备厚层包被用于 3D 细胞培养。细胞可以嵌在康宁 Matrigel matrix 中或者接种在康宁 Matrigel matrix 表 面(覆盖法)。 使用 Corning Matrigel matrix 时,需要将移液器吸头和离心管预冷吗? 是的。因为 Corning Matrigel matrix 在高于10℃的条件下即会开始成胶,我们推荐操作 Matrigel matrix 时使用预冷的移液管、吸头和离心管。 Corning Matrigel matrix 会快速聚合吗? Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃时会快速聚合成胶。 什么情况下,需要使用无酚红 Corning Matrigel matrix? 对于涉及颜色检测的实验,推荐使用无酚红 Corning Matrigel matrix,如使用荧光 染料或 Drabkins 法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养,也需使用无酚红 Corning Matrigel matrix。 此外,酚红和非甾体雌激素结构类似,有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有 干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。 如何从 Corning Matrigel matrix 中收获细胞? 推荐使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 来收获培养在 Matrigel matrix中的细胞。 Corning Dispase 相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细 胞悬液,不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞,使用 Corning Dispase 不会产生损伤。此外,Corning Dispase 也可以用于组 织分离。 对于代谢研究和 RNA 抽提,建议在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 进行非酶反应的细胞收获。因为 Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA,进行 RNA 分析时,应设一个 Corning Matrigel matrix(不接种细胞)的对照组。 其它从 Corning Matrigel matrix 中收获细胞的方法: 降低温度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚,需要一定的时间并且仅适合 一部分应用。 离心以破坏 Corning Matrigel matrix结构。 1. Corning® Matrigel® matrix包被过的培养皿可以储存多长时间呢? 包被过的培养皿最好当天使用,具体情况取决于实验目的。需要保存的情况下,可在37°C 培养箱中最多存放7天。保存时Matrigel表面需要使用无血清培养基均匀覆盖,保持湿润。 2. 如何确定Corning® Matrigel® matrix的包被用量?
3. 哪些情况下应该选用薄胶?什么时候用厚胶呢? 3D培养有哪些应用? 薄胶主要用于辅助细胞贴壁,有利于细胞增殖。如原代细胞培养,需要一层薄薄的蛋白层 辅助,就可以选用薄胶;厚胶主要用于3D细胞培养,如大鼠主动脉组织分化为毛细血管 样结构(Ring Assay),以及进行细胞侵袭实验等;3D细胞培养实验,主要是用于研究 细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构,如生物组织等。 详细信息请参阅Corning® Matrigel® matrix使用指导手册。 4. 进行内皮管形成实验,应该选用多大浓度的Matrigel呢? 进行该实验,Matrigel最低浓度应不低于10mg/mL。 5. 所有的Corning® Matrigel® matrix 都可以用于人胚胎干细胞(hESC) 培养吗? 不是的。Corning提供专门用于人胚胎干细胞(hESC)培养的Corning® Matrigel® matrix (货号为 354277)。该产品生产过程中经过严格的质量监控,可以保证hESC培养的一致性、可重复性和高度可靠性。在干细胞培养领域知名的STEMCELL Technologies公司, 也正是选用此产品包被的培养板,用于生产其mTeSR®1产品。hESC在mTeSR1培养体系 中可以维持未分化状态,保持标准形态并正常表达表面标志物。 此外,Corning BioCoat™ Matrigel matrix提供预包被产品,如预包被的6孔板(货号 354671)。该系列产品不同批次间的Matrigel包被浓度一致,方便用户使用;用于hESC 培养,可以维持干细胞应有的自我更新能力和多能性。如果使用非专门用于hESC培养的 Corning® Matrigel® matrix培养hESC,细胞培养效果可能不理想,不推荐用户使用。 6. 做细胞侵袭实验,需要使用多少Corning® Matrigel® matrix进行包被? 包被24孔通透性支持物,推荐每孔使用0.1 mL (浓度200-300 μg/mL) ,Corning® Matrigel® matrix货号为354234, 354230 。 7. Corning® Matrigel® matrix的最低成胶浓度是多少? 不同的实验目的需要不同的Matrigel浓度,用户应该根据具体的实验需求确定。Corning® Matrigel® matrix最低成胶浓度为 3 mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释,不同批次 间的Matrigel浓度有差异,应该根据最终工作浓度 (mg/mL)算出需要加入的稀释液体(如 PBS或无血清培养基)的量。用于体内研究的Matrigel,为了避免成胶不完全,最终工作 浓度不应低于 4 mg/mL。 8. Corning® Matrigel® matrix胶块在体内可以维持多长时间? 基质胶胶块可以在体内维持至少一周的时间。 9. 怎样稀释Corning® Matrigel® matrix? 使用冰上预冷的无血清培养基或者PH 7.4的PBS。 10. 应该如何对Corning® Matrigel® matrix移液操作? 推荐使用预冷的移液器或者注射器操作,移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底部;分液时切忌过快、用力过猛。如果使用移液管(Pipets),需要分液5mL时,应该吸取6mL,分液到移液管内仍有1mL时即停止;如果使用自动移液器(Pipetman),按压到第二档位吸液,然后按压到第一档位进行分液。 11. 为什么我的Corning® Matrigel® matrix很粘稠? 基质胶的蛋白浓度越高,胶体越粘稠。如果浓度高于13.0 mg/mL,基质胶会显得非常厚 重。Corning® Matrigel® matrix基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。 粘稠的高浓度Corning® Matrigel® matrix(Corning® Matrigel® matrix HC)不稀释也可以直接使用,如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子,注射于小鼠体内后,细胞可以保持原位,便于原位分析和/或以后的切除;或者稀释后,按照标准浓度的Corning® Matrigel® matrix产品使用方法使用,具体稀释浓度根据实验需求确定。 除因为产品本身浓度高而粘稠外,基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有 关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏Corning® Matrigel® matrix的冰箱带有自动除霜功能,冰箱除霜过程中升温,可能使基质胶成胶。所以,切忌将Corning® Matrigel® matrix储藏于此类冰箱中。 为保证Corning® Matrigel® matrix的使用效果,冻融次数应该尽可能减少。拿到新的 Corning® Matrigel® matrix后,请按照单次用量进行分装。每次融化操作,Matrigel基质胶 都应该放置于冰上。如果Matrigel基质胶在成胶状态被冻住,再次融化时将不能成恢复液 体。 12. Corning® Matrigel® matrix可以诱导ES/iPS细胞分化吗? 可以的,已经有相关文章表明 Corning® Matrigel® matrix可以用于ES/iPS细胞的分化研 究。 13. 为什么Corning® Matrigel® matrix在37°C 成胶,而在4°C 时却呈液体状态? Corning® Matrigel® matrix是一种从小鼠骨肉瘤中提取的重组基底膜, 新鲜提取的原料中 主要包括以下成分:层粘连蛋白,IV型胶原, 巢蛋白,基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰 岛素生长因子及其他生长因子。这些蛋白构成了Matrigel的基本结构。在22℃-37℃温度条件下,大分子间的共价键可以结合,促使Matrigel形成凝胶。而在低温条件(如4℃)下, 由于没有足够的能量促使共价键结合,所以Matrigel呈现液体状态。 14. Corning® Matrigel® matrix可以反复冻融吗? 建议用户第一次融化后按照单次用量进行分装,保存。 15. 为什么细胞没有贴壁?Matrigel 也脱落了? 首先需要检查细胞的接种浓度是否过高,Corning Matrigel的用量应等同于细胞培养体系 中培养基的用量。如果Corning® Matrigel® matrix被稀释到过低的浓度,形成的胶体容易 从组织培养器皿表面分离。 16. 未稀释的Corning® Matrigel® matrix中出现的沉淀应该怎么样处理? 4°C 下低速离心,去除沉淀物 。 17. 未使用完的Corning® Matrigel® matrix应该怎样保存的? 与细胞培养基或缓冲液混合过但未使用完的Corning® Matrigel® matrix,不建议保留再用。 18. Corning® Matrigel® matrix中含有 DNA和/或RNA吗? 是的。Corning® Matrigel® matrix没有经过DNA酶或RNA酶消化处理,可能会含有痕量的 DNA、RNA。 19. Corning® Matrigel® matrix中有血管内皮生长因子(VEGF)和金属蛋白酶 (MMPs)吗? 在标准浓度的Corning® Matrigel® matrix中含有 5.0-7.5 ng/mL 的血管内皮生长因子 ( VEGF),GFR Corning® Matrigel® matrix中VEGF含量为1.0-1.5 ng/mL。另外,可能 含有老鼠肿瘤细胞来源的痕量金属蛋白酶(MMPs)。 20. Corning® Matrigel® matrix中有 LDEV吗? 没有的。Corning® Matrigel® matrix经免疫方法及PCR方法检测,并不含有乳酸脱氢酶增高 病毒(LDEV)或者乳酸脫氫脢增生病毒(LDHV) 。此外,我们还针对小鼠群体及肿瘤 来源筛查了其他种类的病毒。详细信息请参见产品说明书。 21. Corning® Matrigel® matrix中有尿素吗? 没有的。在Corning® Matrigel® matrix生产准备过程中使用过尿素,后续流程中经过透析 方法已经去除了。 22. Corning® Matrigel® matrix中使用的什么缓冲液? 低葡聚糖 DMEM (1g/L),其中包含 50 µg/mL 庆大霉素。 23. Corning® Matrigel® matrix 中含有纤维连接蛋白(Fibronectin)吗? 是的,通过使用Western Blot检验,我们在Matrigel matrix中发现了微量的纤维连接蛋白 (Fibronectin) 24. Corning® Matrigel® matrix 中含有玻璃体结合蛋白( vitronectin)吗? 某些 EHS组织中可能含有微量的血液,因此Corning® Matrigel® matrix中可能会有痕量的 玻璃体结合蛋白(Vitronectin) 。 25. Corning® Matrigel® matrix 中还有什么别的物质? Corning® Matrigel® matrix 中还可能含有浓度小于 0.02%的三氯甲烷,以及肿瘤细胞的产生的其 他未知蛋白或分子。 26. 提取过程会引起层粘连蛋白变性吗? 不会的,不会引起层粘连蛋白变性。 27. Corning® Matrigel® matrix 可以储存在 -70℃吗? 是的。Matrigel matrix 可以储存在-70℃。建议客户将整瓶的 Matrigel matrix 进行分装,储存 于聚丙烯或其他可以耐受超低温条件材质的小管中,方便保存和使用。 28. Corning® Matrigel® matrix 的折射率是多少? 20°C 条件下,Corning® Matrigel® matrix 的折射率是 1.3406 到 1.3407,相对折射率为 1.0056(同等条件下,水的折射率为 1.333)。 29. Corning® Matrigel® matrix 会有自发荧光吗? Corning® Matrigel® matrix 是一种蛋白混合物,经过透析处理后溶解在 DMEM 培养基中。为防止微生物污染,培养基中添加了庆大霉素。所以 Corning® Matrigel® matrix 可能引发荧光的组分包括其中的蛋白质成分,维生素成分以及庆大霉素(氨基糖苷类抗生素)。如果需要使用荧光检测细胞生长状态,建议使用者建立对照实验,在所需要的波长条件下进行对比,以便排除背景荧光。 30. 使用 Matrigel 培养的细胞,如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验,该怎样固定呢?如何避免解聚? 可以使用 2%浓度的多聚甲醛进行固定。为避免固定后出现解聚的情况,可以加入 1%浓度的戊二醛。戊二醛作为固定剂,常用于电镜观察。如果用户需要进行免疫荧光检验,加入戊二醛后,会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题,我们建议用户在固定之后,使用 NaBH4 进行淬灭。NaBH4 极易气泡,进行该步骤时,必须在水平操作台上小心操作,避免晃动,尽量减少气泡的形成。另外,用户也可以尝试使用较低浓度的戊二醛进行固定,如 0.1%到 0.5%, 浓度越低,背景荧光信号越少。 |