biotechne产品使用常见技术问题解答-Antibody 抗体及其应用

2.1 General常规问题

一抗和二抗之间有何结构上的区别? 一抗和二抗在结构上相似，它们具有相似的类/亚类。从结构上讲，抗体是由三个大小相等的区域组成的y形分子。由一个灵活的 铰链连接抗体柄(Fc)到抗体臂[F(ab)]。抗体臂（也叫抗原结合片段fragment antigen binding，Fab）的作用是结合抗原，而抗体 柄（也叫可结晶片段fragment crystallizable，Fc）决定了抗体的同型和功能特性。 每条抗体臂由一条重链和一条轻链组成。此外，这些重链和轻链由一个可变区(VL或VH)和一个恒定区(CL或CH)组成。重链和轻链 的可变区域(V)在抗体之间存在差异，并赋予其互补抗原抗体特异性。Fc的可变性不大，但对抗体与效应分子和细胞的相互作用很 重要(图A)。 在命名方面，二抗是根据它们的来源、形式、反应性、目标抗原、特异性、标签和纯化等级来命名的 (图B)。

什么是抗体类别/亚类别（class/subclass）及同型对照（Isotype Control）?    抗体重链Fc部分的变异可将抗体分为五个类型（class）: IgA, IgD, IgE, IgG及IgM。 五个类型的重链（Heavy Chain）分别用对应的希腊字母表示: α (Alpha), δ (Delta), ε (Epsilon), γ (Gamma), and μ (Mu)。抗体 的轻链(Light Chain)只有λ (lambda) 与κ (kappa)两类。 由于重链的进一步变化，IgG和IgA还有亚类(subclass)。 需要注意：每个抗体只会有一类轻链或重链，不会同时有两个。 同型对照（Isotype Control）指与抗体相同种属来源、相同亚型的免疫球蛋白，用于排除实验结果中由于抗体非特异性结合造成 的干扰。

IgG的分子量是多少？ IgG蛋白由两条重链和两条轻链组成。重链大约是55kDa，轻链大约是25kDa。总分子量约为160kda。

单克隆抗体与多克隆抗体的区别，该如何选择？

将一抗与生物素偶联会影响其与二抗的亲和力吗? 如果您使用低摩尔接触或低浓度的生物素进行偶联反应，那么偶联的一抗通常不会影响其与二抗的亲和力。此外，大多数的二抗 为多克隆抗体，可以结合一抗的多个表位，所以影响不大。

什么情况下需要使用片段特异性二抗，如针对Fc、F(ab)或F(ab’)2的二抗?   当您试图检测的一抗仅由特定的片段组成或者需要从多个免疫球蛋白分子中检测特定的片段时，可以使用片段特异性二抗。当目 的一抗与抗原特异性结合暴露了Fc或F(ab)区域时，也可以使用。

什么是预吸附（Pre-absorbed）或者交叉吸附（cross adsorbed）抗体？ 预吸附也称为交叉吸附，是增加抗体特异性的额外步骤。将抗体(例如，识别兔IgG轻链的抗体)通过固定有来自潜在交叉反应物种 的血清蛋白的吸附柱(例如，识别绵羊和牛轻链的抗体)。只有兔IgG链特异性抗体才能通过该柱。而与羊或牛IgG轻链交叉反应的 抗体将结合并停留在基质上。此步骤能够增加抗体的特异性，特别是针对担心交叉反应的应用例如免疫组化。

什么是功能性（functional）及封闭/中和（blocking/neutralizing）抗体? “功能性”一词用于描述蛋白质是否具有功能活性。功能活性可以通过多种方式来测量，例如蛋白质抑制细胞增殖的能力。如果该 蛋白具有功能活性，通常在我们的产品说明中会提供特定实验的ED50值，以供研究人员参考。 封闭/中和指抗体与抗原结合，以防止抗体或抗原发挥作用。例如，具有阻断或中和活性的肽段可用于与抗体结合，从而防止它与 其他物质结合；或者抗体与重组蛋白结合，以防止重组蛋白与细胞上的受体结合行使功能。 此类缩写均为泛指，购买前请联系技术支持确认具体应用是否可行。

如何了解产品规格及外观，为何我收到抗体为空管？ 请参考产品CoA中的Formulation栏中的信息。冻干粉类（Lyophilized）产品（蛋白，抗体等）若含有BSA，冻干粉会较明显。抗 体通常不含BSA，由于冻干工艺原因可能会有无色透明、薄膜状或者胶冻状等形态，这些均为正常状态。冻干粉状态的抗体需要 按照推荐的方法重溶后才能使用。

如何查询贵司抗体产品的浓度及COA R&D Systems®品牌产品页面内均有COA图标链接至COA搜索引擎，输入批号（Lot#）可查询到COA中有相应的产品信息(Formulation)，如果是液体（Solution），会有相应的浓度信息。除偶联抗体（偶联生物素，荧光基团）外，大部分R&D Systems®品牌 抗体为冻干粉（Lyophilized）形式，需要根据COA要求使用推荐的重溶缓冲液重溶至合适的储存浓度并分装保存。 Novus Biologicals®品牌抗体产品的规格可以在产品页面的Packaging, Storage & Formulations一栏查看，会有溶液（Buffer）信 息，部分产品会直接有浓度（Concentration）信息。COA请联系技术支持。大部分Novus Biologicals品牌抗体为液体形式，也会存在冻干粉（Lyophilized）形式的产品。 需要注意几点： 1.绝大多数液体产品的浓度会标记在管壁的标签上，若标签无信息或尚未购买，需咨询Novus总部； 2.部分液体产品的Size是以质量单位（mg）而非体积单位（ml）标记，需要以Packaging, Storage & Formulations一栏中产品具 体形式为准； 3.部分Novus Biologicals®抗体产品是未经纯化（Unpurified）的腹水或抗血清产品，本身无法准确测量抗体的浓度。

此抗体是否添加防腐剂？防腐剂的作用是什么？对抗体有影响吗？ 是否添加防腐剂可以参考产品COA中的Formulation。绝大多数R&D Systems®品牌产品不添加防腐剂。部分Novus Biologicals® 品牌产品添加防腐剂，会在Packaging, Storage & Formulations一栏中显示。 添加防腐剂的目的是延长抗体的半衰期，以便长期储存。不论添加防腐剂与否，我司抗体在合适的储存条件下都能够按照质保要 求保证质量。 常见防腐剂叠氮化钠（Sodium azide）用于抑制细菌生长，但不会影响抗体的特异性 (抗原与之结合的部分)。有些情况，最好使 用不含防腐剂的抗体，因为叠氮（azide）会干扰抗体标记反应，还会抑制抗体标记的酶(HRP等)活力。此外，高浓度的叠氮化物 还需受到法规/健康和安全警告。

抗体中的是否会添加海藻糖（Trehalose）？ 海藻糖是一种非还原糖，在美拉德反应中（美拉德反应是还原性糖与氨基酸在高温下作用，发生的显色反应）不与氨基酸或蛋白 质发生反应。它存在于自然界的许多植物和动物中。海藻糖可以稳定蛋白质，防止冷冻造成的伤害，还可以使蛋白质在冻干时更 耐水，从而使产品在重溶时产生沉淀的可能性更小。 大多数情况下抗体溶液或者冻干粉中不会添加海藻糖，抗体中是否添加海藻糖会在产品的Formulation或者Buffer栏中提及，如果 没有写海藻糖（Trehalose），就是没有添加。

冻干粉类抗体的重溶/复溶（Reconstitution）方法 除非说明书上有更具体的说明，我们建议采用以下方式： 1. 将试剂瓶和重溶缓冲液平衡至室温。 2. 短暂离心试剂瓶以确保在小瓶底部收集所有冻干物。 3. 加入推荐的重溶缓冲液，达到产品说明上推荐的浓度。避免剧烈振荡或移液器吹打，这可能导致抗体变性。 4. 使试剂瓶在室温下重溶15-30分钟，可使用360度摇床或手动轻轻上下颠倒确保充分重溶。 5. 我们建议使用无菌的聚丙烯管（Polypropylene）分装抗体储存液，每管体积大于20μL分装，并按产品说明书上的指示储存。 如果小瓶内呈现薄片或颗粒，则在室温下将产品混合几小时，然后在4℃过夜。若产品依然无法溶解，请联系技术支持。 详情可以参考我司官方微信公众号RnDSystems（互动达人-操作视频）及Bilibili（UID:509961500）上相关的视频。

贵司抗体产品有抗原表位（Epitope）的信息吗？ 除非特别标明，我们的R&D Systems®品牌产品不鉴定或提供抗原表位信息，我们会在说明书中提供抗体的免疫原信息供参考。 绝大多数Novus Biologicals®品牌产品也只提供免疫原信息，少数会有抗原表位信息，具体参考说明书或网页信息。

我查到某个抗体已经停产（Discontinued），有没有办法获得停产的库存? 通常产品停产的原因包括缺乏商业兴趣，来自外部合作者的供应中断，或不可预见的生产困难。一个产品很少会因为质量问题而停产。我们理解这可能会给我们的客户带来不便，我们将尽最大努力推荐合适的替代方案。请联系我们的技术支持团队，以帮助寻找任何潜在的替代产品。一旦我们在网站上列出此抗体停产，除非有设置缓冲期的通知，通常说明库存已经清空，不会有剩余。

如何查询贵司产品现货及货期 客户可以联系销售及代理商查询查询国内实时库存现货、R&D Systems®国外库存及货期。

Novus Biologicals®若国内无现货，货期可以在官网中切换为美国地址查看产品页面进行初步判断，国外实际库存情况需要技术支持联系Novus Biologicals®确定。

贵司抗体标明的应用IHC、IF、ICC，是如何质保的？ 首先需要注意我司抗体产品与其他品牌的一个概念区别： 传统的免疫荧光（IF）指使用荧光染料抗体在组织或者细胞上定位。 我司产品的应用分类方式是按照样本类型分类: 细胞样本的免疫化学及免疫荧光归为ICC/IF; 组织样本的组织化学及荧光应用归为IHC：其中组织石蜡切片的组化及荧光统一归为IHC-P，组织冰冻切片为IHC-Fr，全组织固定 （比较少见）为IHC-Whole Mount。 我司产品不会存在单独标记IF的应用，传统的IF涵盖了ICC/IF，IHC-P与IHC-Fr甚至IHC-Whole Mount，不能作为质保的标准。

我司R&D Systems®与Novus Biologicals®两大品牌抗体产品的质保政策有一定的差异： R&D Systems®品牌抗体保证所有产品页面显示已经验证的种属（Species）及应用(Application)，这些应用通常在说明书中会有 详细的信息。 特别注意： R&D Systems®品牌抗体应用中IHC或者ICC/IF只要有一项，则可以质保IHC及ICC/IF这两大类应用。R&D Systems®将为IHC以及 ICC/IF在冰冻切片（IHC-Fr）和石蜡包埋切片（IHC-P）中验证的任何抗体提供支持，除非说明书中另有声明。虽然我们不能确定 一种抗体在每一种组织中都有同样的表现，但我们可以证明对固定抗原的识别。我们的技术服务部门将协助客户一起排除故障。 如果说明书中没有IHC以及ICC/IF标志，说明我们没有任何数据来支持这个应用，因此我们不能保证这两个应用的结果。

Novus Biologicals®品牌的产品页面中列出的所有种属（Species）及应用(Application)均受到质保。 除去Novus Biologicals®自身验证的种属及应用外，部分列出种属及应用是根据种属同源性预测、引用文献报道或者客户Review。 虽然Novus Biologicals®自身并未验证，只要列在产品页面中（说明书中可能未列出）显示，均属于质保范围。 特别注意： 1.不同于R&D Systems®品牌，Novus Biologicals®的IHC与ICC/IF两种应用不能相互质保。 2.若有单独标志IHC的子类（IHC-Fr、IHC-P或IHC-Whole Mount），只质保单独标志的子类，如果只有IHC标志而无子类标志， 则质保所有的IHC子类。 3.若有(-) 标志，代表验证过为阴性的种属或者应用，此类也不属于质保范围。

Novus Biologicals®质保举例： 抗体A标注了IHC，则可以质保IHC-P，IHC-Fr，不能质保ICC/IF； 抗体B标注了IHC，IHC-Fr则可以质保IHC-Fr，不能质保IHC-P及ICC/IF； 抗体C标注了ICC/IF则可以质保ICC/IF，不能质保IHC-P及IHC-Fr。

2.2 R&D Systems®产品特异问题

R&D Systems®小包装（Small-package, SP）抗体是否都是液体的？ 不一定，也有可能是冻干粉，一切以CoA中Formulation说明为准。

R&D Systems®抗体是否是无菌的？ 尽管我司的R&D Systems®抗体产品使用的是无菌技术包装，高温杀菌的容器以及无菌储存方案，但他们并不能保证是无菌的。如 果实验需要确保无菌，可以用0.2微米的滤膜过滤，不过这可能会损失部分抗体。

R&D Systems®抗体的保质期是多久? R&D Systems®制定了不限制产品使用期限的政策，不会规定我们蛋白质和抗体产品的失效期或生产日期。在适当的存储条件下， 蛋白质和抗体将稳定多年。这些条件包括以冻干粉形式存储蛋白质，以大于0.1mg/mL的蛋白质浓度存储冷冻的产品（-20°C或 -80°C）以及限制冻融循环的次数。请参阅各个产品说明书。我们公司的常规质量控制测试可确保所有产品在销售时都具有可接受 的生物活性。R&D Systems®无法控制终端用户的存储条件。在实验室的正常条件下使用时，R&D Systems®保证产品达到或超过 我们提供的技术参数。通常，保质期为自购买之日起6-12个月。特殊要求，请参见各产品说明书Stability&Storage一栏。如果产 品在规定的期限内出现问题，我们将提供质保。

抗体货号AB###, AF###, BAF###, MAB###，MAB###R及BAM###的区别?

AB###编号的抗体是使用蛋白A、蛋白G或离子交换色谱纯化的多克隆抗体。因此，所得到的纯化抗体是一个总的IgG片段，可能 包含对抗原非特异的IgG。 AF### 编号的抗体指定是经过抗原亲和纯化，然后通过离子交换或分子筛进一步纯化的，因此，是特异性针对抗原IgG抗体。 MAB###编号的抗体是单克隆抗体，MAB###R是MAB###编号的重组抗体。 BAF###与BAM### 编号的抗体是AF### 与MAB###编号抗体对应的生物素化版本。

重组抗体（Recombinant Antibody）是什么？ 重组抗体又称基因工程抗体，是指利用重组DNA 及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配，经转 染适当的受体细胞所表达的抗体分子。 相对传统的单克隆抗体，具有更好的稳定性并且可以稳定供应。R&D Systems®可以提供重组抗体转换和修饰等服务。 详情可见：https://www.rndsystems.com/cn/products/recombinant-antibodies

R&D Systems®品牌抗体的应用质保原则 R&D Systems®品牌抗体保证所有产品页面显示已经验证的应用，这些应用通常在说明书中会有详细的信息。 需要注意的是，R&D Systems®品牌抗体应用中IHC或者ICC/IF只要有一项，则可以质保IHC及ICC/IF这两大类应用：R&D Systems® 将为IHC/ICC在冰冻切片和石蜡包埋切片中验证的任何抗体提供支持，除非说明书中另有声明。虽然我们不能确定一种抗体在每 一种组织中都有同样的表现，但我们可以证明对固定抗原的识别。我们的技术服务部门将协助客户一起排除故障。 如果说明书中没有IHC/ICC标志，说明我们没有任何数据来支持这个应用，因此我们不能保证结果。由用户决定是否在其应用中 使用该抗体。客户可以查询产品网页上的Citations菜单或联系技术支持，咨询产品是否适用于特定类型样本的此类应用。

R&D Systems®品牌的匹配抗体对（matched antibody pairs）是什么? R&D Systems® 匹配抗体对产品有助于ELISA系统的开发。R&D Systems® 已经证明该抗体对可用于三明治型（Sandwich）ELISA 的免疫分析，识别重组蛋白。我们建议研究者在尝试使用这些产品前，应具有免疫分析开发方面的专业知识。每个研究者必须根 据经验确定捕获（Capture）和检测（Detection）抗体的最佳浓度。 需要注意的是，抗体对的质量并未根据ELISA系统使用量进行标准化，R&D Systems® 重组蛋白也未针对ELISA系统进行校准，因 此在使用前需要进行质量校准（Mass Calibration）。 我们的DuoSet® ELISA开发型试剂盒产品线包含抗体对，已进行质量校准的标准品，酶进行免疫分析的基本protocol，相对于单 独购买的抗体对及重组蛋白，更方便开发ELISA系统。

可以用R&D Systems®抗体与其他公司的标准品构建ELISA系统吗? 可以，但是有一些潜在的问题需要考虑。如果作为标准品的重组蛋白与作为抗体免疫原的重组蛋白的折叠或序列不同，则免疫识 别或抗体与重组蛋白结合方面可能存在差异。

生物素化(BAF)产品中生物素与抗体的摩尔比是多少? 我们并未检测偶联反应后的生物素:抗体比。R&D Systems®在反应混合物中使用了10mol/L的生物素偶联抗体，估计每个IgG中有 5-14个生物素分子。

抗体产品是否曾被用于说明书中未列出的应用？ 如果说明中未列出特定应用，则可能意味着该产品在此进行过测试或者可能意味着此应用在内部测试未达到我们的质量控制要求。我们不会对未列出的应用进行质量保证。但客户可以查看我们的“引文Citation”标签，了解其他研究人员是否已发布您感兴趣 的应用，样本类型或物种，作为参考 。

IVD抗体原料类产品，为何没有随附说明书或COA文件？ IVD产品主要指R&D Systems®品牌的IVD抗体原料（货号ABT开头） 此类产品定位是IVD抗体原料，面向客户是熟练的技术人员，主要内容均在COA中呈现。 通常情况下产品发货会随附COA，但COA文件生成需要人工操作，所以偶尔会出现滞后于产品的情况。如果遇到此类情况，请及时联系技术支持索取。