如何正确阅读STEMCELL分选说明书

本文以#17852 EasySep™ Human CD4 Positive Selection Kit II 作为举例对象,主要解读使用紫色磁极18000的部分。

(1)

For processing 1 x 10^9 cells表示可处理的样本量是多少，并非得到的目的细胞量。如果一次处理 1 x 10^8 cells，则该KIT可以用10次。

(2)

Description的部分会告知该KIT适用于哪些类型的样本，如果您的样本不在说明书所述范围内，请联系STEMCELL技术支持（400-885-9050）或武汉安特捷生物（027-87660672）。

(3)

Sample Preparation的部分会给出不同样本的处理方法，比如冻存的PBMC就需要用到DNA酶防止细胞结块粘连。

(4)

操作步骤中标注A的地方需要按照细胞量计算。

比如A1，如果起始细胞是1×10^8cells, 则是用1ml buffer重悬，如果计数结果是5×10^7cells, 则是用0.5ml buffer重悬。所以分选前请一定计数。准确的计数是保证抗体、磁珠、细胞三者达到最优结合的关键。如果细胞起始量达不到最低的2.5×10^7cells，请按最低的体积加buffer，抗体和磁珠。如果超过，请分次分选或选用更大的磁极。

A2是指加入抗体（Selection Cocktail）的量，如果1×10^8cells, 则需使用50ul Selection Cocktail，如果是5×10^7cells，则需减半，用25ul。

A3磁珠部分（RapidSpheres）的计算方法同理。

(5)

说明书所有标注了mix的地方，请用移液器轻柔操作，避免产生气泡。

(6)

分选需要用到的是聚苯乙烯材质的流式管，请不要随便用离心管，玻璃管等。使用流式管的时候不用特别选用带盖的，我们更建议使用不带盖子的流式管。

(7)

补加足到2.5ml，此时磁极才能发挥出它的最大作用，面积密度达到最优比，请不要自行更改这个体积。

(8)

一次性倾倒，不犹豫，不反复，速度要快，留在管壁的即为目的细胞。

(9)

正选kit，流式检测用到的抗体需要注意一下克隆号，请使用推荐的克隆号，避免磁珠分选抗体将某些识别位点占用，造成流式染色不充分。